Cara menggunakan senjata gen

1. Persiapan bahan

Lapisan tipis media ditempatkan pada piringan kultur 9 cm2, dan bahannya (biasanya embrio belum matang, embrio matang, kalus kecil, sel suspensi, protoplas, dll.) Dilapis di tengah piringan dengan diameter 3 cm .

2, pengobatan bubuk emas

Ambil 60mg bubuk emas atau bubuk tungsten dalam tabung centrifuge, tambahkan 1ml etanol absolut, kocok dengan baik selama 3 menit, centrifuge untuk 1rain pada 9615g, angkat supernatan, tambahkan 1ml air steril dan aduk rata, centrifuge pada 9615g, ulangi langkah 3 di atas. Waktu. Akhirnya, bubuk emas disuspensikan dalam 1 ml air suling steril dan disimpan pada suhu 4 'C atau pada suhu kamar.

3, pemrosesan DNA

Ambil suspensi bubuk emas 50tA, tambahkan 5 plasmid DNA (1,0 / lg ~ 1) solusi, 50 // l

0,1 mol / L spermidine (larutan yang digunakan adalah steril-steril), dikocok selama 3 menit, dibiarkan pada suhu kamar selama 10 menit, disentrifugasi pada 9615 g selama 10 detik, buang supernatan; tambahkan 250 ~ 1 etanol absolut, kocok ke Centrifuge pada 9615 g selama 10 detik dan buang supernatan. Pelet diresuspensi dalam 60/1 1 etanol absolut dan digunakan untuk 5 tembakan (10 banding 1 per tembakan).

4, operasi senjata gen

Semua operasi senjata gen dilakukan dalam kondisi aseptik, sebagai berikut:

1) Bersihkan permukaan gen pistol dan ruang sampel dengan etanol 70%. Pada saat yang sama, jaring penghalang dan cakram yang dapat dibelah, pembawa mikro-elastis, penahannya dan alat pemasangan direndam selama 15 menit dengan etanol 70%, dan kemudian ditempatkan di bangku bersih untuk mengeringkan. Diafragma yang dapat dipisah, penutup tetap, dan alat peluncur pembawa mikro-elastis dapat disterilkan permukaan dengan etanol 70% dan ditiup kering.

2) Masukkan slide partikel mikro ke dalam cincin penahan, dan tambahkan campuran DNA dan bubuk emas ke tengah slide partikel mikro dan keringkan selama sekitar 1 menit.

3) Pasang membran yang dapat pecah pada dudukannya dan putar searah jarum jam ke akselerator gas.

4) Pasang cincin antariksa, jaring pemblokir, penahan jaring pemblokir, pembawa partikel dan cincin pengikat (wajah dengan partikel menghadap ke bawah), kencangkan penutupnya, dan masukkan ke dalam pegangan.

5) Tempatkan sampel di ruang pemboman dan tutup pintu.

6) Buka katup utama silinder helium dan putar katup regulator helium searah jarum jam sehingga indikasi penunjuk pengukur tekanan lebih tinggi daripada tekanan diafragma 200Psi (= 1,379MPa).

7) Nyalakan saklar senjata gen dan transformator.

8) Tekan tombol vakum. Saat ruang hampa udara adalah 26-28 dalam Hg (= 88,05 ～ 94,82 kPa), tekan tombol Tahan dengan cepat, lalu tekan dan tahan tombol peluncuran dan simpan sampai diaktifkan.

9) Tekan tombol ventilasi untuk mengatur ulang sampel setelah tabel vakum telah memusatkan perhatian.

10) Matikan.

Kencangkan sakelar utama silinder helium, tekan pistol kosong, kembalikan pointer pengukur tekanan ke nol, lalu putar katup penyesuaian pengukur tekanan berlawanan arah jarum jam; matikan sakelar utama gen gun dan sakelar transformator.