Masalah umum ketika homogenizer ultrasonik merusak Escherichia coli

E. coli mengekspresikan protein asing. Ketika disonikasi, itu ditangguhkan dalam PBS yang mengandung 1% triton-X-100. Efek ultrasonik lebih baik. Efek 1% triton-X-100 masih jelas. Pekerjaan, seperti Streptomyces.

Bakteri presipitasi langsung menambahkan sampel 1buffer, tambahkan 5 ml merkaptoethanol, campuran, centrifuge, didihkan selama 10 menit, langsung memuat, pewarnaan dan langkah-langkah penghilangan warna adalah sebagai berikut: masukkan lem ke dalam jumlah yang tepat dari cairan pewarna dalam oven microwave selama 1 menit, pewarnaan solusi diganti dengan jumlah besar. Air dapat dimasak dalam microwave selama 10 menit.

Setelah mengekspresikan protein rekombinan, sel-sel terganggu oleh gelombang ultrasonik, menggunakan penangas es, 400W, dan 2S berhenti untuk 1S, tetapi sejumlah besar busa dihasilkan dalam waktu singkat, yang mempengaruhi efisiensi penghancuran. Buffer pbs dan tris sama, dan akhirnya penghancurannya tidak lengkap. Tetapi protein target saya ada di sel-sel yang tidak terputus ini, yang membuat saya tidak bisa mendapatkan hasil percobaan.

Biarkan saya memberi Anda analisis mengapa situasi dan solusi ini.

1. Gelembung akan dihasilkan karena posisi probe Anda tidak ditempatkan dengan baik, probe harus dekat dengan bagian bawah, sekitar 1 cm (saya biasanya 0,5 cm dari bawah), instrumen akan memiliki tingkat daya yang berbeda, tetapi Anda dapat mengamati halaman, ada fluktuasi tetapi Jangan terlalu agresif.

2. Super 3S berhenti 10S, USG sekitar 20 kali untuk melihat efeknya

3. Perhatikan posisi tanduk. Jika Anda salah, Anda harus menyesuaikannya tepat waktu. Selain itu, dari sudut pandang konsentrasi bakteri, cobalah untuk meningkatkan volume saat dihancurkan, kekuatannya tidak boleh melebihi 60%.

4. Coba 8S untuk Super 8S. Untuk beberapa protein bakteri, metode Anda sulit untuk menghilangkan panas, menghasilkan denaturasi protein dan pembentukan gelembung. Yang terbaik adalah berhenti sebentar. Ini lebih umum dalam bentuk badan inklusi.